肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是免疫炎症反应中极具代表性的多效性细胞因子。作为TNF/TNFR超家族的核心成员，TNF-α在免疫介导的炎症性疾病的发生发展中发挥核心调控作用^[1]。从类风湿关节炎、炎症性肠病到银屑病、多发性硬化，TNF-α的信号通路紊乱广泛参与各类自身免疫疾病的病理进程。

 TNF-α的功能复杂性，首先源于其两条结构迥异、作用机制相互制衡的的受体通路：TNFR1与TNFR2。

TNF-α/TNFR信号通路示意图

TNFR1广泛表达于几乎所有有核细胞，其胞内段含有一个关键的死亡结构域，当TNF-α与TNFR1结合后，可激活NF-κB通路介导炎症反应，并可诱导细胞凋亡或坏死性凋亡^[2]。在炎症性疾病中，TNFR1通路的过度激活是组织损伤、滑膜增生和关节破坏的直接诱因。全基因组关联研究（GWAS）已证实，TNF超家族多个基因（包括LTA、TNFSF4等）的多态性与类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、哮喘等疾病的易感性显著相关^[1]。

与TNFR1截然不同，TNFR2的表达高度局限于Treg等免疫细胞，且不含死亡结构域，主要通过激活NF-κB通路和PI3K/Akt等通路维持Treg细胞扩增、存活和功能维持^[2]。这意味着，非选择性地阻断TNF-α，在抑制炎症的同时，也可能误伤TNFR2介导的免疫平衡，干扰机体正常修复机制。

临床研究为这一机制风险付出了惨痛的教训。在类风湿关节炎和炎症性肠病中大获成功的非选择性TNF抑制剂（如阿达木单抗），在治疗多发性硬化患者的临床试验中因同时阻断TNFR2而破坏了Treg介导的免疫稳态，导致病情恶化，相关临床试验被迫提前终止^[3]。

基于这一临床局限，新一代抗炎药物研发迎来全新方向：开发能够精准区分TNFR1和TNFR2的选择性抑制剂，旨在有效遏制病理性炎症的同时，保留TNFR2介导的免疫调节和组织修复功能。

如果说TNF-α是炎症的核心调控因子，那么IL-6就是炎症级联放大进程中的关键效应分子。作为TNF-α下游重要效应细胞因子，两者在炎症调控网络中形成紧密的级联关系^[4]。大量研究表明，在细胞因子风暴、急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征中，TNF-α的升高常先于IL-6，而IL-6 持续高表达，则是导致组织损伤和多器官衰竭的主要直接执行者^[4]。

IL-6信号系统的独特之处在于其双模态信号转导机制^[5]：

IL-6双模态信号传导机制示意图

IL-6与膜结合型IL-6R（mIL-6R）结合，进而招募gp130二聚化启动JAK/STAT等下游通路。这一模式主要局限于表达mIL-6R的免疫细胞和肝细胞，介导急性期反应和免疫调节功能，具有生理保护性作用^[6]。

IL-6与可溶性IL-6R（sIL-6R）结合形成的复合物，进而结合几乎所有细胞表面都表达的gp130。由于gp130广泛分布，反式信号能够激活传统IL-6R阴性的细胞（如内皮细胞、成纤维细胞、某些神经元），是IL-6促炎和致病效应的主要途径^[6]。

正是由于这种双模态特性，直接全面阻断IL-6虽然有效，但易干扰机体正常生理免疫功能。因此，新一代IL-6靶向疗法的研发方向是选择性阻断反式信号通路，精准抑制病理炎症，最大程度保留免疫监视和组织修复功能。

目前，IL-6/IL-6R作为靶点的临床价值已得到充分验证。托珠单抗（Tocilizumab）和萨特利珠单抗（Satralizumab）已在类风湿关节炎、全身型幼年特发性关节炎、CAR-T治疗相关的细胞因子释放综合征（CRS）以及视神经脊髓炎谱系疾病等适应症中获得批准^[7]。

TNF-α与IL-6在炎症通路中构成紧密的上下游调控关系：TNF-α通过激活NF-κB直接上调IL-6的转录和分泌；IL-6则通过STAT3通路放大和维持炎症反应。

这一协同关系对药物开发提出了关键问题：单一靶点阻断是否足够？ 临床实践表明，部分对TNF抑制剂响应不佳的患者，换用IL-6抑制剂后仍可获益，提示IL-6存在TNF-α非依赖性的活化途径。

在此背景下，在药物筛选阶段完成TNF-α/TNFR1、TNF-α/TNFR2和IL-6/IL-6R三大核心节点的系统性平行评估，已成为新一代差异性抗炎药物研发的必要策略。

结合炎症通路的复杂调控机制与创新药物研发的迫切需求，ACROBiosystems百普赛斯依托于成熟的TR-FRET技术平台，全新上线三款抑制剂筛选试剂盒，覆盖TNF-α/TNFR1、TNF-α/TNFR2和IL-6/IL-6R核心作用节点，为您提供高通量、高效率、高灵敏的药物筛选工具。

Q

为什么ACRO选择深度开发TR-FRET抑制剂筛选试剂盒，而不是ELISA？

在抑制剂筛选场景中，ELISA虽应用广泛，但其核心设计初衷为样本含量检测，并非分子互作阻断效应评价。将其直接用于抑制剂筛选，存在明显局限：操作流程繁琐，洗板步骤密集，难以适配高通量自动化筛选；反复洗涤易流失弱结合活性分子，人为误差干扰较大，可能无法客观反映弱亲和力抑制剂的真实作用效果。

而TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）是一种先进的均相检测技术，该技术巧妙地结合了时间分辨荧光（TRF）与荧光能量共振转移（FRET）两种原理的优势：通过使用镧系元素（如Eu、Tb）作为长寿命供体荧光，延迟检测窗口，从而有效消除培养基、化合物或生物样品自身荧光带来的背景干扰，大幅提升信噪比和检测灵敏度。TR-FRET将复杂的检测方法开发过程简化为“稀释-混合-孵育-检测”的简易流程，支持在微孔板中直接进行均相检测，无需洗涤，极大地提高了实验效率、结果的可靠性与重复性，是实现高通量药物筛选和精准生物学研究的强大工具。

The kit is suitable for the detection and characterization of TNF-alpha / TNFR1 inhibitors. It was shown that the anti-TNF-alpha antibody (Adalimumab) disrupted the interaction, with an IC50 of 0.6675 nM. The anti-TNFR1 antibody (Atrosab) disrupted the interaction, with an IC50 of 1.165 nM. The anti-TNFR2 antibody showed no significant inhibitory effect in the assay as expected.

Human TNF-alpha / TNFR2 Inhibitor Screening Kit(TR-FRET)

Cat. No. FRT-P028

The kit is suitable for the detection and characterization of TNF-alpha/TNFR2 inhibitors. It was shown that the anti-TNF-alpha antibody (Adalimumab) disrupted the interaction, with an IC50 of 0.8714 nM. The anti-TNFR1 antibody (Atrosab) showed no significant inhibitory effect in the assay as expected.

The kit is suitable for the detection and characterization of IL-6 / IL-6 R alpha inhibitors. It was shown that the two anti-IL-6 antibodies (FRTP023-C03 & Siltuximab) disrupted the interaction, with an IC50 of 0.4261 & 0.4943 nM. The anti-IL-6 R antibody (Tocilizumab) disrupted the interaction, with an IC50 of 3.348 nM. The anti-TNF-alpha (Adalimumab) showed no significant inhibitory effect in the assay as expected.

三款全新TR-FRET试剂盒的核心组分均源自从ACRO自主研发生产的TNF-α、TNFR、IL-6、IL-6R系列重组蛋白。从源头把控品质，为稳定、精准的筛选结果筑牢基础：

> 高纯度与天然构象：经SEC-MALS验证，保障蛋白天然聚合状态与空间结构

> 高生物活性：经ELISA、SPR、BLI及细胞水平实验验证，免费提供protocol

> 低内毒素：低于1.0 EU/μg，适配动物免疫、细胞及功能学实验 

> 高批间一致性：严格标准化QC体系，保证实验可重复性

> 多场景适配：覆盖多种属、多样化标签，可灵活满足种属交叉验证、免疫检测、功能研究等各类实验需求。

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参考文献：

[1]. Veerasubramanian PK, Wynn TA, Quan J, Karlsson FJ. Targeting TNF/TNFR superfamilies in immune-mediated inflammatory diseases. J Exp Med. 2024;221(11):e20240806. doi:10.1084/jem.20240806

[2]. Doss GP, Agoramoorthy G, Chakraborty C. TNF/TNFR: drug target for autoimmune diseases and immune-mediated inflammatory diseases. Front Biosci (Landmark Ed). 2014 Jun 1;19(7):1028-40. doi: 10.2741/4265. PMID: 24896334.

[3]. Pegoretti V, Baron W, Laman JD and Eisel ULM (2018) Selective Modulation of TNF–TNFRs Signaling: Insights for Multiple Sclerosis Treatment. Front. Immunol. 9:925. doi: 10.3389/fimmu.2018.00925

[4]. ingran Chen, Weihua Lu, Ying Li, Zhanchen Guo, Qian Liu, Weiwei Liu, Lisheng Wang, Zhen Liu,Tri-specific molecularly imprinted lysosomal nanodegrader enables synergistic therapy of cytokine storm, Chemical Science, Volume 16, Issue 42, 2025, Pages 2, ISSN 2041-6520,>[5]. Villar-Fincheira P, Sanhueza-Olivares F, Norambuena-Soto I, Cancino-Arenas N, Hernandez-Vargas F, Troncoso R, Gabrielli L and Chiong M (2021) Role of Interleukin-6 in Vascular Health and Disease. Front. Mol. Biosci. 8:641734. doi: 10.3389/fmolb.2021.641734

[6]. Schumertl T, Lokau J, Garbers C. IL-6 Signaling in Immunopathology: From Basic Biology to Selective Therapeutic Intervention. Immunotargets Ther. 2025;14:681-695. Published 2025 Jul 5. doi:10.2147/ITT.S485684

[7]. Li X, Zhao C. Interleukin-6 in neuroimmunological disorders: Pathophysiology and therapeutic advances with satralizumab. Autoimmun Rev. 2025;24(7):103826. doi:10.1016/j.autrev.2025.103826